華雅旗下紅榮微再授權(quán)代理（上海）TAKARA CellArtis，Rubicon產(chǎn)品 

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產(chǎn)品圖片僅供參考。實(shí)際產(chǎn)品為三個(gè)套裝。

從開(kāi)始到結(jié)束

人iPS細(xì)胞基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)

產(chǎn)品英文名稱：hiPSC Editing and Single-Cell-Cloning Systems

產(chǎn)品中文名稱：人iPS細(xì)胞基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)

產(chǎn)品包括三個(gè)完整系統(tǒng)（試劑盒）。包括兩種基因編輯方法和單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基。可以選擇使用電穿孔技術(shù)或納米囊泡（gesicles）技術(shù)進(jìn)行CRISPR/Cas9的基因編輯。

單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基系統(tǒng)：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+包被劑+添加劑

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)

基因編輯系統(tǒng)（均包含上述培養(yǎng)基）

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643)

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個(gè)完整的，在無(wú)飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴(kuò)增和擴(kuò)大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細(xì)胞至96孔板到擴(kuò)增至48孔板過(guò)程中所有必要的試劑。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個(gè)完整的系統(tǒng)，允許通過(guò)電穿孔的方法對(duì)hiPSCs進(jìn)行有效的基因編輯以及隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個(gè)完整的系統(tǒng)，允許通過(guò)gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進(jìn)行有效的基因編輯隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。Gesicles是一種無(wú)毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細(xì)胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

☆高效率的hiPSC基因編輯— 使用電穿孔技術(shù)或納米囊泡（gesicles）技術(shù)傳遞Cas9蛋白和sgRNA，無(wú)需基因組整合并減少脫靶效應(yīng)

☆單細(xì)胞存活率—當(dāng)單細(xì)胞接種在96孔板中時(shí)編輯后hiPSC表現(xiàn)出高（通常約50％）存活

☆基因編輯后和單細(xì)胞克隆過(guò)程中維持多能性 - hiPSC維持高水平（> 90％）的多能性標(biāo)記物Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4

☆從頭到尾保持穩(wěn)定的核型 —在基因編輯，單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增期間保持正常和穩(wěn)定的核型

☆基因編輯實(shí)驗(yàn)方法靈活—完整試劑盒包括兩種編輯方式和不止一種單細(xì)胞克隆方式

☆在整個(gè)基因編輯/單細(xì)胞克隆過(guò)程中連續(xù)使用DEF-CS技術(shù)— 基因編輯前后使用Cellartis DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)（貨號(hào)Y30010），單細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)后使用同一培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行放大培養(yǎng)

Highly efficient gene editing in hiPSCs—use either electroporation or gesicles to deliver Cas9 protein and sgRNA with no genomic integration and reduced off-target effects

Superior single-cell survival—edited hiPSCs exhibit high (typically ~50%) survival when seeded as single cells in a 96-well plate

Maintenance of pluripotency after editing and during single-cell cloning—hiPSCs maintain high levels (>90%) of pluripotency markers Oct-4, TRA-1-60, and SSEA-4

Stable karyotype from start to finish—maintain a normal and stable karyotype throughout editing, single-cell cloning, and expansion

Flexibility to perform gene editing experiments your way—choose from complete kits that provide editing and single-cell cloning solutions using either electroporation-based (Code No. 632643) or gesicle-based (Code No. 632642) CRISPR/Cas9 techniques, or utilize the culture media kit (Code No. Y30021) to perform efficient single-cell cloning following your own editing experiments

Continuous use of DEF-CS technology throughout gene editing/single-cell cloning experiments—use the Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010) before and during gene editing experiments, then during scale-up after single-cell cloning experiments

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產(chǎn)品應(yīng)用

CRISPR / Cas9介導(dǎo)的hiPSC基因編輯

hiPSC的單細(xì)胞克隆

疾病建模

產(chǎn)品組成 

單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基

Y30021 Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 1 Kit

基因編輯系統(tǒng)（保護(hù)單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基）

632643 Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System 1 Kit

632642 Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System 1 Kit

Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 

（Code No. Y30021，1 kit）

iPS單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+包被劑+添加劑

· Cellartis DEF-CS 500 Basal Medium (Code No. Y30011; 500 ml)

· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 (Code No. Y30018; 2 × 800 μl)

· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Additives (Code No. Y30019; 2 × 750 μl, 1 × 500 μl, 1 × 500 μl)

Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System

(Code No. 632643; 1 system)

iPS細(xì)胞 rCas9電穿孔和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)：sgRNA+Cas9+iPS單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基

· Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 1 kit)

· Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (Code No. 632641; 100 μg)

· Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit (Code No. Y30021; 1 kit）

Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System

（Code No. 632642；1 system）

iPS細(xì)胞CRISPR/Cas9納米囊泡和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)：納米囊泡+iPS單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基

· Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (Code No. 632613；1 kit)

· Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit (Code No. Y30021;1 kit）

基因編輯后iPS細(xì)胞的多能干性：表達(dá)多能細(xì)胞表面標(biāo)記物的細(xì)胞比率

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) growing in DEF-CS medium were edited with Cas9 and sgRNA specific to CD81. Pluripotency is maintained in edited human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that have been seeded as single cells. 12 clonal lines created from single-seeded hiPSCs exhibit high levels of Oct-4 (97-99%), TRA-1-60 (98-99%), and SSEA-4 (98-99%).

參考文獻(xiàn)

Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90-104 (2016).

Jinek, M. et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science 337, (2012).

Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012-9 (2014).

Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347-55 (2014).

背景介紹

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的基因編輯

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個(gè)功能強(qiáng)大的研究工具和疾病模型，因?yàn)槠渚邆湓鲋场⒆晕腋?、分化為多種細(xì)胞類型的能力。此外，人iPS細(xì)胞還可以再現(xiàn)細(xì)胞來(lái)源個(gè)體的疾病表型和基因型。將人iPS細(xì)胞結(jié)合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，可以在同基因的細(xì)胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因?yàn)榛蚓庉嬤^(guò)的人iPS細(xì)胞能提供可再生的、無(wú)遺傳變異的患病細(xì)胞和健康細(xì)胞資源。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成為一個(gè)強(qiáng)大的基因編輯工具，因?yàn)槠涓叩陌邢蛱禺愋?，編輯效率和易用性。該技術(shù)的強(qiáng)大主要源于它的簡(jiǎn)單，因?yàn)槿恐恍枰粋€(gè)Cas9核酸酶結(jié)合一個(gè)單鏈向?qū)NA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復(fù)途徑的易錯(cuò)特性，進(jìn)而產(chǎn)生基因敲除(通過(guò)插入/刪除)。這種方法也可以通過(guò)同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過(guò)多種方法成功導(dǎo)入至靶細(xì)胞，包括基于載體的表達(dá)系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染, 導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實(shí)驗(yàn)的方法，同時(shí)脫靶效應(yīng)的可能性更小（Kim et al. 2014)。

一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細(xì)胞必須被分離并擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細(xì)胞建立一個(gè)克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時(shí)的，因?yàn)閔iPS 細(xì)胞是以集落生長(zhǎng)和傳代的。通常，這會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)包含一個(gè)成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個(gè)基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來(lái)的挑戰(zhàn)，允許單細(xì)胞傳代和促進(jìn)接種的單細(xì)胞存活和后續(xù)擴(kuò)增。

華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司主營(yíng)細(xì)胞治療和精準(zhǔn)醫(yī)療等產(chǎn)品，2018年與TAKARA繼續(xù)合作，授權(quán)代理（上海）其旗下Cellartis干細(xì)胞研究制品和Rubicon單細(xì)胞文庫(kù)構(gòu)建試劑。Cellartis公司位于瑞典，擁有iPS細(xì)胞等干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞及臟器細(xì)胞的分化誘導(dǎo)技術(shù)和ES細(xì)胞，ips細(xì)胞，分化細(xì)胞等干細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品。

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